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是細菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法，這種染色法是由一位丹麥醫生漢斯·克里斯蒂安·革蘭（Hans Christian Gram，1853年－1938年）于1884年所發(fā)明，最初是用來(lái)鑒別肺炎球菌與克雷白氏肺炎菌之間的關(guān)系。

未經(jīng)染色之細菌，由于其與周?chē)h(huán)境折光率差別甚小，故在顯微鏡下極難觀(guān)察 。染色后細菌與環(huán)境形成鮮明對比，可以清楚地觀(guān)察到細菌的形態(tài)、排列及某些結構特征，而用以分類(lèi)鑒定。

相關(guān)選擇

革蘭氏陽(yáng)性菌：葡萄球菌屬（主要是金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等）、鏈球菌屬（肺炎鏈球菌、草綠色鏈球菌、腸球菌等）、白喉桿菌、炭疽桿菌、破傷風(fēng)桿菌、蠟樣芽孢桿菌等，其中，金黃色葡萄球菌、腸球菌等為臨床重要等病原菌。

革蘭氏陽(yáng)性菌通常對青霉素類(lèi)、第一（或第二）代頭孢菌素、萬(wàn)古霉素、克林霉素等高度敏感，但是因為抗生素的濫用，MRSA/MRSE、VRSA/VISA、PISP/PRSP、VRE等多重耐藥菌已經(jīng)嚴重威脅著(zhù)人類(lèi)的生命，這些細菌感染時(shí)，可以考慮使用萬(wàn)古霉素、共殺素（奎奴普丁/達福普?。?、利奈唑胺、達托霉素、泰利霉素、夫西地酸（建議與耐酶的青霉素類(lèi)或利福平聯(lián)用）等。另外，CNS（凝固酶陰性葡萄球菌）等細菌也要引起足夠等重視。

革蘭氏陰性菌：埃希氏菌屬、枸櫞酸菌屬、假單胞菌屬（綠膿桿菌等）、莫拉菌屬（卡他莫拉菌等）、奈瑟菌屬（淋球菌、腦膜炎雙球菌等）、不動(dòng)桿菌屬（鮑曼不動(dòng)桿菌、羅菲不動(dòng)桿菌等）、克雷伯菌屬（主要是肺炎克雷伯桿菌）、沙門(mén)氏菌屬、志賀氏菌屬（痢疾桿菌等）、黃桿菌屬、變形桿菌屬、軍團菌屬、耶爾森菌屬、嗜NDM-1血桿菌屬（杜克雷嗜血桿菌、流感嗜血桿菌等）、產(chǎn)氣桿菌屬、霍亂弧菌、陰溝腸桿菌等。革蘭氏陰性菌在院內感染中的細菌感染中占了大約65%，且大多菌株容易對抗菌藥物耐藥，產(chǎn)生“新德里金屬酶”（）的絕大多數細菌都是革蘭氏陰性菌（主要是大腸桿菌、鮑曼不動(dòng)桿菌和肺炎克雷伯桿菌）。

革蘭氏陰性菌對第三代頭孢菌素（頭孢他啶、頭孢噻肟、頭孢曲松等）、氨基糖苷類(lèi)（慶大霉素、妥布霉素等）、抗假單胞菌屬的青霉素類(lèi)（哌拉西林、替卡西林、羧芐西林等）、多粘菌素等高度敏感，對頭霉素類(lèi)和第二代頭孢菌素也較敏感，但是，MDR-AB/PDR-AB、PDR-PA等多重耐藥菌給臨床用藥帶來(lái)過(guò)很大的困難。多粘菌素、碳青霉烯類(lèi)（亞胺培南、美羅培南等）、替加環(huán)素等可以用于多重耐藥菌等治療，但要慎用，否則很可能會(huì )到無(wú)藥可醫的地步（綠膿桿菌和鮑曼不動(dòng)桿菌的一些菌株甚至已經(jīng)對碳青霉烯類(lèi)有耐藥性）。值得注意的是，頭孢哌酮/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦、替卡西林/克拉維酸、氧頭孢烯類(lèi)（拉氧頭孢、氟氧頭孢等）對某些多重耐藥菌也有特效，比如產(chǎn)ESBLs或AmpC酶的菌株，可以考慮與其他抗菌藥物（磷霉素等）聯(lián)用，另外，多西環(huán)素和多粘菌素聯(lián)用時(shí)，幾乎對所有對細菌都有協(xié)同抗菌作用，也可考慮。

根據細菌的革蘭氏染色性質(zhì)，可以縮小鑒定范圍，有利于進(jìn)一步分離鑒定，以對疾病做出診斷。又由于各種抗生素的抗菌譜不同，革蘭氏染色尚可做為選用抗生素的參考。

革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個(gè)步驟，具體操作方法是：

1）涂片固定。

2）草酸銨結晶紫染1分鐘。

3）自來(lái)水沖洗。

4）加碘液覆蓋涂面染約1分鐘。

5）水洗，用吸水紙吸去水分。

6）加95%酒精數滴，并輕輕搖動(dòng)進(jìn)行脫色，20秒后水洗，吸去水分。

7）蕃紅染色液（?。┤?分鐘后，自來(lái)水沖洗。干燥，鏡檢。

通過(guò)結晶紫初染和碘液媒染后，在細胞壁內形成了不溶于水的結晶紫與碘的復合物，革蘭氏陽(yáng)性菌由于其細胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密，故遇乙醇或丙酮脫色處理時(shí)，因失水反而使網(wǎng)孔縮小，再加上它不含類(lèi)脂，故乙醇處理不會(huì )出現縫隙，，因此能把結晶紫與碘復合物牢牢留在壁內，使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細胞壁薄、外膜層類(lèi)脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差，在遇脫色劑后，以類(lèi)脂為主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結晶紫與碘復合物的溶出，因此通過(guò)乙醇脫色后仍呈無(wú)色，再經(jīng)沙黃等紅色染料復染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。

染色的差異主要是由于陰性與陽(yáng)性細菌細胞壁的差異所引起的。

①革蘭氏陽(yáng)性細菌的細胞壁

G+細菌細胞壁具有較厚（20-80nm）而致密的肽聚糖層，多達50層，占細胞壁成分的40%～95%，它同細胞膜的外層緊密相連（圖2-9）。有的G+細菌細胞壁中含有磷壁酸（teichoic-acid），也稱(chēng)胞壁質(zhì)（murein），它是甘油和核糖醇的聚合物，磷壁酸通常以糖或氨基酸的酯而存在。由于磷壁酸帶負電荷，它在細胞表面能調節陽(yáng)離子濃度。磷壁酸與細胞生長(cháng)有關(guān)，細胞生長(cháng)中有自溶素（autolysins）酶類(lèi)起作用，磷壁酸對自溶素有調節功能，阻止胞壁過(guò)度降解和壁溶。

如果細胞壁的肽聚糖層被消溶，G+細胞成為原生質(zhì)體（protoplasts），細胞壁不復存在，而只存留細胞膜。除鏈球菌外，大多數G+細菌細胞壁中含極少蛋白質(zhì)。

②革蘭氏陰性細菌的細胞壁 G—細菌細胞壁比G+細菌細胞壁?。?5～20nm）而結構較復雜，分外膜（outer membrane）和肽聚糖層（2～3nm）（圖2-10）。在細胞壁和細胞質(zhì)膜之間有一個(gè)明顯的空間，稱(chēng)為壁膜間隙（periplasmic space）。

外膜 G—細菌細胞壁外膜的基本成分是脂多糖（lipopolysaccharide,LPS），它同細胞質(zhì)膜相同之處也是雙層類(lèi)脂，但除磷脂外還含有多糖和蛋白質(zhì)。

LPS的多糖部分包括核心多糖和O-特異多糖。O-特異多糖由重復分支的碳水化合物分子組成，含有已糖（葡萄糖、半乳糖和鼠李糖）和二脫氧已糖。由于糖的種類(lèi)不同，使各種G—細胞具有不同特性的LPS。核心多糖（core polysaccharide）的主要組分是酮脫氧辛酸（ketodeoxyoctonate, KDO）。

外膜中還含有幾種蛋白，如脂蛋白、通透蛋白。有些蛋白具有通孔作用（porin），調控外界分子進(jìn)入細胞；有的蛋白分子可以作為噬菌體的受體；許多G—細菌對高等生物有致病性是由LPS的成分決定的，它的毒性組分常稱(chēng)為內毒素（endotoxins）。

肽聚糖層 G—細菌細胞壁的肽聚糖層很薄，在大腸桿菌和其它細菌中僅有單

層。肽聚糖層和外膜的內層之間通過(guò)脂蛋白連接起來(lái)。

壁膜間隙 G—細菌細胞壁的外膜與細胞質(zhì)膜之間存在明顯的壁膜間隙，一層薄的肽聚糖處于其間，肽聚糖層和細胞質(zhì)膜之間的間隙較寬，肽聚糖層至外膜之間的間隙較窄。大腸桿菌的壁膜間隙寬度為12～15nm，呈膠胨態(tài)。其間含有三類(lèi)蛋白質(zhì)：水解酶，催化食物的初步降解；結合蛋白，啟動(dòng)物質(zhì)轉運過(guò)程；化學(xué)受體（chemoreceptors），在趨化性中起作用的蛋白。

革蘭氏陽(yáng)性菌呈藍紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。

其重要的臨床意義在于：1.鑒別細菌 2.選擇藥物 3.與致病性有關(guān)：革蘭氏陽(yáng)性菌能產(chǎn)生外毒素，革蘭氏陰性菌能產(chǎn)生內毒素；而內毒素主要是指革蘭氏陰性菌胞壁成分中的脂多糖，兩者的致病作用不同。

革蘭氏染色屬復染法，即將標本固定后，先用龍膽紫染色，加碘液媒染后用酒精脫色，再用蕃紅復染。染色后除可以看到細菌形態(tài)外，還可將細菌分為兩大類(lèi)，即不被酒精脫色而保留紫色者為革蘭氏陽(yáng)性菌（G+）。被酒精脫色復染成紅色者為革蘭氏陰性菌（G-）。革蘭氏染色原理尚不肯定，可能與細菌所帶核糖核酸、細菌壁結構通透性、等電點(diǎn)等因素有關(guān)。致病菌如金黃色葡萄球菌、綠色溶血性鏈球菌、肺炎球菌、白喉桿菌、碳疽桿菌等屬革蘭氏染色陽(yáng)性菌。百日咳桿菌、大腸桿菌、傷寒桿菌、痢疾桿菌、霍亂弧菌、流行性腦膜炎雙球菌、淋病雙球菌等均屬革蘭氏陰性。

該染色法所以能將細菌分為G+菌和G-菌，是由這兩類(lèi)菌的細胞壁結構和成分的不同所決定的。G-菌的細胞壁中含有較多易被乙醇溶解的類(lèi)脂質(zhì)，而且肽聚糖層較薄、交聯(lián)度低，故用乙醇或丙酮脫色時(shí)溶解了類(lèi)脂質(zhì)，增加了細胞壁的通透性，使初染的結晶紫和碘的復合物易于滲出，結果細菌就被脫色，再經(jīng)蕃紅復染后就成紅色。G+菌細胞壁中肽聚糖層厚且交聯(lián)度高，類(lèi)脂質(zhì)含量少，經(jīng)脫色劑處理后反而使肽聚糖層的孔徑縮小，通透性降低，因此細菌仍保留初染時(shí)的顏色，呈現藍紫色。